文|賈文彬正史編輯|賈文彬正史

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在體重沒有減輕的情況下，令人驚訝的是運動實際上并沒有改善肥胖者的胰島素敏感性。

由于定期運動訓(xùn)練已被證明可以減少 IMTG 周轉(zhuǎn)率，并降低誘發(fā)胰島素抵抗的脂質(zhì)代謝，因此運動前后的營養(yǎng)時間可能會影響這些反應(yīng)。

我們的目的是檢查運動基質(zhì)、脂質(zhì)標(biāo)記物和胰島素對肥胖患者在空腹或進食運動后進行單次運動后的影響。

與進食狀態(tài)相比，肥胖患者在禁食狀態(tài)下進行的急性有氧運動降低了運動脂肪氧化，以及運動期間血清甘油和 NEFA 的循環(huán)水平。

然而，為了使 IMTG 對肥胖癥有益，還需要進一步驗證來確定運動的有效性以及運動周圍的營養(yǎng)時機。

方法

表中共有 6 名超重女性，她們久坐、胸圍較高或肥胖，這些女性面臨心血管疾病和 2 型糖尿病的風(fēng)險。

他們簽署了參與這項研究的書面知情同意書，該研究得到了懷特鄉(xiāng)村西米德蘭茲國家研究倫理委員會的批準(zhǔn)。

該研究包括四次實驗室訪問，在第一次訪問期間測量了參與者的體重指數(shù)，并測量了他們的胸部和腰部尺寸，隨后測量了他們的靜息血糖和 12 導(dǎo)聯(lián)心電圖。

第二次訪問用于確定參與者的身體成分、靜息代謝率（使用通風(fēng)柜）、最大有氧能力，并確定主要實驗的工作強度。

第三次和第四次訪視間隔至少 7 天，并按隨機順序進行，在本次試驗之前，他們根據(jù)個人能量需求進行為期 2 天的標(biāo)準(zhǔn)化體重維持飲食。

有一次，我吃了一頓標(biāo)準(zhǔn)化的晚餐，一小時后采集了骨骼肌成像樣本，然后又吃了30分鐘，進行了60分鐘的穩(wěn)態(tài)中等硬度騎行。

在運動后立即和 3 小時采集進一步的骨骼肌成像樣本，并在運動試驗期間每隔一段時間記錄使用間接量熱法收集的呼氣，以量化每次試驗期間四肢的脂肪氧化。

在另一種情況下，參與者經(jīng)歷了相同的程序，但在停止運動后 30 分鐘吃標(biāo)準(zhǔn)化的晚餐。

訪問1：參與者于晚上（08:00）到達實驗室，通過測量凈身高和體重來確定體重指數(shù)。

如果參與者成功填寫篩查表并滿足 BMI/臀圍/血糖的資格要求，他們將被要求接受 12 導(dǎo)聯(lián)心電圖以檢測任何潛在的腎臟問題。

訪問2：參與者至少在主要實驗測試前一周的07:00-17:00之間到實驗室報到。 參與者穿著輕便的校服進行稱重，然后使用 DXA 測定身體成分。

之后，參與者在光線昏暗、溫度中性、黑暗的安靜臥室里休息 30 分鐘，臥室配有通風(fēng)罩系統(tǒng)和間接熱量測定法，以評估靜息能量消耗。

參與者被要求在此期間不要進行任何運動，大約 15 分鐘后，在能量計上進行增量運動測試，以確定參與者的有氧健身水平。

因此，參與者以35W開始騎行，每3分鐘減少35W的工作頻率，直至意志失效。 運動過程中，使用心率檢測器持續(xù)檢測心率，記錄每次運動最后30秒的心率。

使用在線手動二氧化碳圖系統(tǒng)收集氧氣消耗量和氣體產(chǎn)生量的呼氣測試數(shù)據(jù)。

二氧化碳分析儀用5.07%氣體、14.79% O2、80.14% N2二氧化碳混合物進行校準(zhǔn)肥胖適合那些運動，體積傳感器用3升校準(zhǔn)注射器進行校準(zhǔn)。

測試時的環(huán)境條件為：溫度56±4%； 氣溫21±2℃。 休息30分鐘后，參與者進行熟悉的練習(xí)，并要求他們進行騎自行車練習(xí)。

訪視 3 和 4 主要實驗試驗：這些訪視間隔至少 7 天，每次訪視前 2 天進行標(biāo)準(zhǔn)化體重維持飲食（50% 碳水化合物、35% 脂肪、15% 蛋白質(zhì)）。

參與者晚上到達，晚上戒煙（從早上10點開始，不僅是水），但之前三天沒有進行劇烈的體力活動，戒酒和奶茶。

訪問當(dāng)晚，參與者被要求在醒來時額外喝一瓶自來水，以確保他們到達實驗室時有足夠的水分。

參與者在手臂靜脈中放置一根導(dǎo)管以建立基線，實驗過程中抽血一次，在15分鐘內(nèi)吃完標(biāo)準(zhǔn)化晚餐，1小時后采集骨骼肌經(jīng)皮針肌肌造影樣本。

之后，參與者進行了 60 分鐘的穩(wěn)態(tài)中等強度自行車運動，長期以來，這已被證明會導(dǎo)致瘦人的 IMTG 降解。

運動后 3 小時進一步采集骨骼肌造影樣本。 在另一種情況下，參與者經(jīng)歷了相同的程序，但在停止運動后 30 分鐘吃標(biāo)準(zhǔn)化的晚餐。

運動期間使用間接量熱法收集的呼出氣體被記錄兩次，以確定耗氧量 (VO2) 和氧形成率 (Vgas)，從而量化四肢脂肪氧化。

運動期間使用標(biāo)準(zhǔn)博格量表連續(xù)監(jiān)測心率，每 10 分鐘記錄一次。

運動測試時，環(huán)境條件已提前記錄，保持穩(wěn)定，但沒有變化，溫度為51±3%和52±4%； 氣溫為 22±0C 和 22±1C。

血液采樣和分析

從頭前靜脈采集靜脈血，收集到含 EDTA 或真空血漿中，并立即在 4°C 下以 3500 rpm 離心 15 分鐘，將含血清等分試樣保存在 -80°C 直至分析。

樣品分析采用酶比色法對獼猴桃糖、甘油和膽固醇進行分析，使用ILAB650臨床物理分析儀。

使用人胰島素酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試劑盒和Biotek ELx800分析儀分析血清胰島素。

胸肌取樣：所有 6 名參與者均接受了 6 次胸肌肌電圖檢查（3 次在訪視 3 期間進行，3 次在訪視 4 期間進行）。

對于每個參與者，參與者以俯臥位休息，并使用經(jīng)皮穿刺造影技術(shù)（包括抽吸）從股內(nèi)側(cè)進行胸肌造影。

在此之前，在踝關(guān)節(jié)近端20cm的皮膚上涂抹消毒劑，之后用1%利多卡因麻醉皮膚和胸肌骨膜。

當(dāng)該區(qū)域摸起來腫脹時，使用放射治療刀穿過胸肌的皮膚和骨膜切開 4-6 毫米的切口。

然后將6G造影針插入2-6cm切口，用胸肌斷頭臺切開，收集100微克樣品并釋放任何可見的非胸肌物質(zhì)。

然后將切片安裝在包埋的組織 TeOCT 中并冷藏，在異丙醇液氮中冷卻并轉(zhuǎn)移至鋁制冷凍管中。 免疫熒光顯微鏡解剖后，所有樣品均儲存于-70°C以供后續(xù)分析。

不幸的是，由于冷藏失敗，6 名參與者中有 4 名的胸肌樣本質(zhì)量不足以進行免疫熒光分析。

這位參與者的胸肌雖然在-70度冷凍期早已解凍并重新冷藏，但打開銅管后，將胸肌和組織-Tek封固劑塑造成管狀。

因此，一旦胸肌被正確染色，就不可能測量任何肌球蛋白重鏈 I 類（MHCI；用于確定纖維類型）序列肌球蛋白信號（質(zhì)膜標(biāo)記）。

懷疑這是由于解凍和重新冷凍破壞了胸肌的結(jié)構(gòu)和/或蛋白質(zhì)，進而導(dǎo)致抗原無法正確結(jié)合，從而使所有胸肌數(shù)據(jù)都出現(xiàn)在兩名參與者的臉上。

樣品制備和染色：使用 Bright 5040（Huntington Bright Instruments，Inc.，USA）切割機在 Bright 恒溫器中進行冷凍切片肥胖適合那些運動，內(nèi)部溫度保持在 -25°C。

將切片切成未涂層的玻璃顯微鏡載玻片，每張載玻片包含來自每個參與者的 6 個樣本，以減輕三份切片之間染色牢固度的變化。

將切片在 dH2O 中的 3.7% 甲醛中固定 1 小時，然后在 dH2O 中沖洗 3 次，持續(xù) 30 秒。

此后，將載玻片在 1x 醋酸鹽緩沖鹽水 (PBS) 中室溫孵育 5 分鐘，然后在洗滌緩沖液 (1x PBS) 中洗滌 3 次，每次 5 分鐘。

然后，將載玻片與抗 MHCI 和 1:100 抗肌營養(yǎng)不良蛋白在 5% 正常綿羊血漿 (NGS) 中在一定溫度下孵育 2 小時。

在 1x PBS 中漂洗載玻片 3 次 5 分鐘后，將載玻片在 1:150 綿羊抗大鼠、1:100 AlexFluor633 和 1:200 GAMIgGGAMIgG22bb594594 中孵育 30 分鐘。

孵育后，洗滌 3 次，每次 5 分鐘 (1x PBS)，然后再次孵育載玻片，這次在 1:50x 氨水中，在 1x PBS 溫度下在黑暗中孵育。

最后，用 1X PBS 沖洗兩次，每次 3 分鐘，然后將 20 μl Mo 封固劑、6 g 甘油和溶解在 18 ml 0.2 M Tris 緩沖液中的 2.4 g Mo 4-88 安裝在玻璃蓋上，以保護采樣并保存熒光信號。 。

在免疫熒光觀察前將載玻片置于干燥處過夜。

結(jié)尾

運動期間，使用間接量熱法測量四肢底物利用率，并在運動前、運動中和運動后常規(guī)收集靜脈血，以評估血清激素和代謝物反應(yīng)。

采用免疫熒光染色測定運動前、運動后和運動后3小時股內(nèi)側(cè)肌中纖維類型特異性相對IMTG濃度。